O le chromatography vai o le auala autu lea mo le suʻeina o mea o loʻo i totonu o vaega taʻitasi ma mea leaga i mea mataʻutia, mea faʻalatalata, sauniuniga ma mea faʻapipiʻi, ae o le tele o vailaʻau e leai ni metotia masani e faʻalagolago i ai, o lea e le maalofia ai le atinaʻeina o auala fou. I le atinaʻeina o auala faʻafefe vai, o le koluma chromatographic o le totonugalemu lea o le chromatography vai, o le auala la e filifili ai se koluma chromatographic talafeagai e taua tele. I lenei tusiga, o le a faʻamatalaina e le tusitala le auala e filifili ai se koluma chromatography vai mai itu e tolu: manatu lautele, iloiloga ma le lautele o le faʻaogaina.
A. Aotelega manatu mo le filifilia o koluma chromatography vai
1. Iloilo mea faʻaletino ma vailaʻau o le analyte: e pei o le vailaʻau, solubility, mautu (e pei o le faigofie ona faʻamaʻiina / faʻaitiitia / hydrolyzed), acidity ma alkalinity, ma isi, aemaise lava le fausaga o vailaʻau o le ki. mea taua i le fuafuaina o meatotino, e pei o le conjugated vaega o loʻo i ai le malosi ultraviolet absorption ma fluorescence malosi;
2. Fuafua le faʻamoemoega o le auʻiliʻiliga: pe maualuga le vavaeeseina, maualuga maualuga le lelei o le koluma, taimi puupuu suʻesuʻe, maualuga le faʻalogo, maualuga le faʻamalosia o le mamafa, ola umi koluma, tau maualalo, ma isi mea e manaʻomia;
- Filifili se koluma chromatographic talafeagai: malamalama i le tuʻufaʻatasiga, mea faʻapitoa ma vailaʻau o le chromatographic filler, e pei o le lapopoa, pore lapoa, faʻapalepale vevela, faʻapalepale pH, adsorption o le analyte, ma isi.
- Mafaufauga mo le filifilia o koluma chromatography vai
O lenei mataupu o le a talanoaina ai mea e tatau ona iloiloina pe a filifilia se koluma chromatography mai le vaʻaiga o mea faʻaletino ma kemisi o le koluma chromatography lava ia. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silica gel matrix O le fa'atumuina o le tele o koluma chromatography vai ole silica gel. O lenei ituaiga o faʻatumu e maualuga le mama, taugofie, maualuga le malosi faʻainisinia, ma e faigofie ona faʻaleleia vaega (e pei o le phenyl bonding, amino bonding, cyano bonding, ma isi), ae o le pH tau ma le maualuga o le vevela e faʻatapulaʻaina: le O le tele o le pH o le tele o le silica gel matrix fillers o le 2 i le 8, ae o le pH o le silica gel bonded phases e mafai ona lautele e pei o le 1.5 i le 10, ma o loʻo i ai foi vaega faʻapipiʻi faʻapipiʻi silica gel e mautu i le maualalo o le pH, pei ole Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, lea e mautu ile pH 1 i le 8; o le tapulaa maualuga o le vevela o le silica gel matrix e masani lava 60 ℃, ma o nisi koluma chromatography e mafai ona faʻafeiloaʻi le vevela o le 40 ℃ i le maualuga o le pH.
2.1.2 Polymer matrix O polymer faatumu e tele lava polystyrene-divinylbenzene po'o polymethacrylate. O latou lelei e mafai ona latou faʻafeiloaʻi i le lautele o le pH - e mafai ona faʻaaogaina i le va o le 1 i le 14, ma e sili atu ona latou teteʻe i le maualuga o le vevela (e mafai ona oʻo i luga ole 80 °C). Pe a faʻatusatusa i le silica-based C18 fillers, o lenei ituaiga faʻatumu e sili atu le malosi o le hydrophobicity, ma o le macroporous polymer e matua aoga tele i le tuʻueseeseina o faʻataʻitaʻiga e pei o polotini. O ona fa'aletonu o le fa'aogaina o le koluma e maualalo ma o le malosi fa'ainisinia e sili atu le vaivai nai lo le fa'atumu o le silica. 2.2 Fa'ailoga o vaega
Ole tele ole fa'atumuina ole HPLC fa'aonaponei o ni vaega fa'apolofesa, ae o nisi taimi o ni vaega e le masani ai. E mafai e mea fa'apolopolo fa'asolo ona maua ai le mamafa o le koluma, maualuga le maualuga o le koluma, mautu ma le umi o le ola; pe a faʻaaogaina vaega feaveaʻi maualuga-viscosity (e pei o le phosphoric acid) poʻo le taimi e viscous ai le faʻataʻitaʻiga fofo, o mea faʻaletonu e iai se vaega faʻapitoa faʻapitoa tele, lea e sili atu ona faʻaogaina i le gaioiga atoa o vaega e lua, ma o le tau e maualalo. 2.3 Lapopo'a o vaega
O le laʻititi laʻititi, o le maualuga o le faʻaogaina o le koluma ma le maualuga o le teteʻa, ae sili atu le leaga o le maualuga o le mamafa. Ole koluma e masani ona fa'aogaina ole koluma 5 μm lapopo'a; pe afai e maualuga le manaʻoga o le vavae ese, e mafai ona filifilia se 1.5-3 μm filler, lea e faʻamalosia e foia ai le faʻafitauli o le vavaeeseina o nisi faʻataʻitaʻiga lavelave ma faʻataʻitaʻiga faʻapitoa. UPLC e mafai ona faʻaogaina 1.5 μm faʻatumu; 10 μm poʻo le tele o mea faʻatumu lapopoa e masani ona faʻaaogaina mo koluma semi-sauniuni poʻo sauniuni. 2.4 I totonu o le kaponi
O le kaponi o lo'o i totonu e fa'atatau i le vaega o le vaega fa'apipi'i i luga o le silica gel, lea e feso'ota'i ma le vaega fa'apitoa ma le vaega fa'apipi'i. O le maualuga o le carbon content e maua ai le maualuga o le koluma ma le maualuga maualuga, ma e masani ona faʻaaogaina mo faʻataʻitaʻiga lavelave e manaʻomia ai le vavaeeseina maualuga, ae ona o le umi o taimi o fegalegaleaiga i le va o vaega e lua, o le taimi suʻesuʻe e umi; maualalo carbon anotusi koluma chromatographic e puupuu le taimi suʻesuʻe ma e mafai ona faʻaalia filifiliga eseese, ma e masani ona faʻaaogaina mo faʻataʻitaʻiga faigofie e manaʻomia ai suʻesuʻega vave ma faʻataʻitaʻiga e manaʻomia ai tulaga maualuga o le vaega vai. E masani lava, o le carbon content o le C18 e mai le 7% i le 19%. 2.5 Pore lapoa ma vaega patino o luga
HPLC adsorption media o ni vaega porous, ma o le tele o fegalegaleaiga e faia i totonu o pores. O le mea lea, e tatau ona ulu atu mole mole i totonu o pores ina ia faʻapipiʻi ma vavae ese.
Ole tele ole pore ma le fa'afanua fa'apitoa o ni manatu fa'atasi e lua. Laiti pore lapoa o lona uiga lapo'a ma'oti vaega o luga, ma vice versa. E mafai ona fa'ateleina le fegalegaleaiga i le va o mole fa'ata'ita'i ma vaega fa'apipi'i, fa'aleleia le fa'atumauina, fa'ateleina le utaina o fa'ata'ita'iga ma le gafatia o le koluma, ma le tu'ueseeseina o vaega lavelave. O mea fa'atumu atoa e aofia i lea ituaiga mea fa'atumu. Mo i latou o loʻo i ai le maualuga o manaʻoga vavae ese, e fautuaina e filifili mea faʻapipiʻi faʻatasi ai ma le tele o mea faʻapitoa; e mafai ona fa'aitiitia le mamafa o tua, fa'aleleia le lelei o le koluma, ma fa'aitiitia le taimi paleni, lea e talafeagai mo su'esu'ega gradient. O mea fa'atumu atigi 'autu e aofia i lea ituaiga mea fa'atumu. I luga o le faʻamoemoega o le faʻamautinoaina o le vavae ese, e fautuaina e filifili mea faʻatumu i luga ole laʻititi faʻapitoa mo i latou e maualuga le suʻesuʻeina o manaʻoga lelei. 2.6 Pore voluma ma le malosi faʻainisinia
Pore volume, lea e taʻua foi o le "pore volume", e faasino i le tele o le void volume i le iunite vaega. E mafai ona atagia lelei le malosi faʻainisinia o le faʻatumu. O le malosi faʻainisinia o mea faʻapipiʻi ma le tele o le pore volume e sili atu le vaivai nai lo le faʻatumuina ma le puʻu laiti. O mea fa'atumu e la'ititi ifo pe tutusa ma le 1.5 mL/g o lo'o fa'aaogaina tele mo le tu'ueseeseina o le HPLC, a'o fa'atumuina ma le voluma pore e sili atu i le 1.5 mL/g e fa'aaogaina mo le molecular exclusion chromatography ma low-pressure chromatography. 2.7 Fa'amauina fua faatatau
O le fa'apipi'i e mafai ona fa'aitiitia ai tumutumu o le si'usi'u e mafua mai i le fegalegaleai i le va o mea fa'afefiloi ma vaega fa'aalia o silanol (e pei o le so'oga ionic i le va o vaega alkaline ma vaega silanol, van der Waals forces ma le hydrogen bonds i le va o vaila'au oona ma vaega silanol), ma fa'aleleia atili ai le lelei o le koluma ma foliga pito i luga. . O vaega fa'apipi'i e le fa'apipi'iina o le a maua mai ai filifiliga eseese e fa'atatau i vaega fa'apipi'i fa'apipi'i, aemaise lava mo fa'ata'ita'iga polar.
- Fa'aoga lautele o koluma chromatography vai eseese
O lenei mataupu o le a faʻamatalaina le lautele o le faʻaogaina o ituaiga eseese o koluma chromatography vai e ala i nisi tulaga.
3.1 Fa'aliliuga-vaega C18 koluma chromatographic
O le koluma C18 o le koluma faʻasolosolo e masani ona faʻaaogaina, lea e mafai ona faʻafeiloaʻi i totonu ma suʻega le mama o le tele o mea faʻalaʻau, ma e faʻaoga i mea tau-polar, vaivai polar ma non-polar. Le ituaiga ma faʻamatalaga o le koluma chromatographic C18 e tatau ona filifilia e tusa ai ma manaʻoga tuʻueseese maʻoti. Mo se faʻataʻitaʻiga, mo vailaʻau e manaʻomia le vavae ese, 5 μm * 4.6 mm * 250 mm faʻamatalaga e masani ona faʻaaogaina; mo mea e iai matrices vavaeesega lavelave ma polarity tutusa, 4 μm * 4.6 mm * 250 mm faʻamatalaga poʻo laʻititi laʻititi e mafai ona faʻaogaina. Mo se faʻataʻitaʻiga, na faʻaaogaina e le tusitala se koluma 3 μm * 4.6 mm * 250 mm e iloa ai le lua faʻaleagaina o le genotoxic i le celecoxib API. O le vavaeeseina o mea e lua e mafai ona oʻo atu i le 2.9, lea e sili ona lelei. E le gata i lea, i lalo o le tulaga o le faʻamautinoaina o le vavae ese, pe a manaʻomia se suʻesuʻega vave, o se koluma puupuu o le 10 mm poʻo le 15 mm e masani ona filifilia. Mo se faʻataʻitaʻiga, ina ua faʻaaogaina e le tusitala le LC-MS / MS e iloa ai se faʻaleagaina o le genotoxic i le piperaquine phosphate API, na faʻaaogaina se koluma 3 μm * 2.1 mm * 100 mm. O le vavaeesega i le va o le le mama ma le vaega autu o le 2.0, ma o le mauaina o se faʻataʻitaʻiga e mafai ona maeʻa i le 5 minute. 3.2 Koluma fenil vaega feliua'i
O le koluma Phenyl o se ituaiga o koluma fa'asolosolo fa'asolosolo. O lenei ituaiga koluma e malosi le filifilia mo mea manogi. Afai e vaivai le tali o mea manogi e fuaina i le koluma masani C18, e mafai ona e mafaufau e sui le koluma phenyl. Mo se faʻataʻitaʻiga, aʻo ou faia le celecoxib API, o le tali autu autu na fuaina e le koluma phenyl o le kamupani lava e tasi ma le faʻamatalaga tutusa (uma 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) e tusa ma le 7 taimi o le koluma C18. 3.3 Koluma tulaga masani
I le avea o se faʻaopoopoga aoga i le koluma faʻasolosolo, o le koluma masani-vaega e talafeagai mo faʻalapotopotoga maualuga. Afai o le tumutumu e vave tele pe a eluting i le sili atu i le 90% aqueous vaega i le koluma feliua'i-vaega, ma e oʻo lava i le latalata ma faʻapipiʻi ma le solvent tumutumu, e mafai ona e mafaufau e sui le koluma masani-vaega. O lenei ituaiga koluma e aofia ai koluma hilic, koluma amino, koluma cyano, ma isi.
3.3.1 Koluma Hilic Koluma Hilic e masani ona fa'apipi'i vaega hydrophilic i le filifili alkyl fusifusia e fa'aleleia ai le tali atu i mea polar. O lenei ituaiga koluma e talafeagai mo le auiliiliga o mea suka. Na fa'aogaina e le tusitala lea ituaiga koluma pe a faia le anotusi ma mea e feso'otai i ai o le xylose ma ona mea e maua mai ai. E mafai fo'i ona tu'u'ese'ese lelei le isomers o le xylose derivative;
3.3.2 Amino koluma ma cyano koluma Amino koluma ma cyano koluma faasino i le folasaga o amino ma cyano suiga i le pito o le filifili alkyl fusifusia, faasologa, e faaleleia ai le filifiliga mo mea faapitoa: mo se faataitaiga, koluma amino o se filifiliga lelei. mo le tuueseeseina o suka, amino acids, faavae, ma amides; Cyano koluma e sili atu le filifilia pe a vavae ese le hydrogenated ma le unhydrogenated fausaga mea tutusa ona o le i ai o sootaga conjugated. E masani ona fesuia'i le koluma Amino ma le koluma cyano i le va o koluma vaega masani ma le koluma fa'asolosolo, ae e le fautuaina le sui soo. 3.4 Koluma o Chiral
O le koluma o Chiral, e pei ona taʻu mai e le igoa, e talafeagai mo le vavaeeseina ma le auʻiliʻiliga o mea faʻapipiʻi, aemaise i le fanua o vailaʻau. O lenei ituaiga koluma e mafai ona mafaufauina pe a le mafai e koluma faʻasolosolo masani ma koluma vaega masani ona ausia le vavaeeseina o isomers. Mo se faʻataʻitaʻiga, na faʻaaogaina e le tusitala se koluma chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm e vavae ese ai isomers e lua o le 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine ma (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, ma o le vavaeeseina i le va o le lua na oʻo i le 2.0. Ae ui i lea, o koluma chiral e sili atu le taugata nai lo isi ituaiga o koluma, e masani lava 1W+/piece. Afai e iai se mana'oga mo ia koluma, e tatau i le iunite ona fai se tala o le tupe ia lava. 3.5 Ion exchange koluma
O koluma fa'afesuia'i o ion e talafeagai mo le tu'ueseeseina ma le au'ili'iliga o ion ua molia, e pei o ions, polotini, nucleic acids, ma nisi o mea suka. E tusa ai ma le ituaiga faʻatumu, ua vaevaeina i latou i koluma fesuiaiga o cation, koluma fesuiaiga o le anion, ma koluma fefaʻatauaʻiga malosi.
O koluma fa'afesuia'i o cation e aofia ai koluma fa'avae calcium ma koluma hydrogen, lea e sili ona talafeagai mo le su'esu'eina o mea fa'a-cationic pei ole amino acids. Mo se faʻataʻitaʻiga, na faʻaogaina e le tusitala koluma faʻavae calcium pe a suʻesuʻeina le calcium gluconate ma le calcium acetate i se vaifofo faʻafefe. O mea uma e lua na i ai ni tali malolosi i le λ = 210nm, ma o le vaeluaga tikeri na oʻo i le 3.0; na fa'aogaina e le tusitala koluma e fa'atatau i le hydrogen pe a su'esu'eina mea e fa'atatau i le kulukose. Ole tele o mea taua e feso'ota'i - maltose, maltotriose ma fructose - e maualuga le ma'ale'ale i lalo ole va'aiga eseese, fa'atasi ai ma le fa'atapula'aina o le iloa e la'ititi ile 0.5 ppm ma le tikeri vavae'ese ole 2.0-2.5.
O koluma fa'afesuia'i anion e sili ona talafeagai mo le su'esu'eina o mea anionic e pei o vaila'au fa'aola ma ion halogen; koluma fa'afesuia'i malosi o lo'o i ai le maualuga o le fa'afesuia'i o ion ma le filifilia, ma e talafeagai mo le tu'ueseeseina ma le au'ili'iliga o fa'ata'ita'iga lavelave.
O lo'o ta'ua i luga ua na'o se fa'atomuaga i ituaiga ma fa'aoga tulaga o le tele o koluma chromatography vai masani fa'atasi ma le poto masani a le tusitala. O loʻo i ai isi ituaiga faʻapitoa o koluma chromatographic i faʻaoga moni, e pei o koluma chromatographic tele-pore, koluma chromatographic laiti-pore, koluma chromatography affinity, koluma chromatography multimode, koluma chromatography vai maualuga-maualuga (UHPLC), koluma chromatography vai supercritical ( SFC), ma isi. Latou te faia se sao taua i vaega eseese. Ole ituaiga patino ole koluma chromatographic e tatau ona filifilia e tusa ai ma le fausaga ma meatotino o le faʻataʻitaʻiga, tuʻueseese manaʻoga ma isi faʻamoemoega.
Taimi meli: Iuni-14-2024